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外泌体最早发C体外培养的ľ红l胞(yu)上清液中Q是l胞(yu)d分泌Q大较为均一Q直径ؓ(f)30~100U米Q密?.10~1.18 g/ml的囊泡样体。随着分子技术的不断发展Q生物学界对外泌体的探烦日趋深入?013q_(d)三位国外U学家因在细?yu)膜转运机制的研I上取得关键性突_(d)被授予诺贝尔生理学或d奖。由此,外泌体的研究辑ֈ了一个全新的高度?
而近q来Q越来越多的证据昄出外泌体对(f)床治疗的重要价倹{外泌体是细?yu)间信Q通过其数量和生物化学l成的变化,可ؓ(f)q一步的临床诊断提供有力的证据。它携带多种蛋白质和miRNAQ参与细?yu)信可{对{细?yu)迁UR血新生和肿瘤l胞(yu)生长{过E,q且有可能成物的天然载体Q应用于肿瘤或临床ȝ?
但目前国内在外泌体研I方面的l验十分有限Q无论是d法、过滤离心还是免疫磁珠法Q都无法同时保证外泌体的含量、纯度以及生物活性。这首先制U了外泌体样本的制取Q进而对后箋的表征造成困难。而测量技术的局限性也极大地阻了外泌体在q些领域的研I进展?
Z与国际先q水qx轨,同时推动中国ȝ事业的发展,使更多中国?zhn)者获得康复良机,q州某三U甲{医院抓住国内外泌体研究的先机,于今q启动了针对骨髓瘤的外泌体表征工作。但是首先,他们在研I设备的选择上犯了难?
在当前中国市Z的外泌体表征方法中Q研Ih员的选择一般有?sh)子昑־镜、流式细?yu)A和动态光散射技术。但?sh)子昑־镜一ơ只能观数量有限的颗粒Q在代表性上存在严重不Q同Ӟ׃?sh)子昑־镜的h制备q程比较复杂Q因此很Ҏ(gu)造成h的Ş态、状态发生改变;式l胞(yu)仪目前公认的量颗粒_径下限?00nm左右Q大大超q了外泌体的_径上限Q而动态光散射技术不适合多分散的复杂外泌体样本的量Q且无法得出样品中外泌体的浓度?
后来Q经q对国际上最尖的研I设备进行慎重分析和比对Q该医院开始留意英国马?dng)文仪器有限公司Q以下简U“马?dng)文”)的品。作为全球材料和生物物理表征领域的领先企业,马尔文ؓ(f)全球众多客户提供高性能的粒度表征解x案,在业界n有盛誉。特别是光用了全新一代纳c颗_跟t分析技术(马尔文专利技术,以下UNTAQ的NanoSight产品pdQ可以直接ƈ实时观测U米颗粒Q通过光学昑־镜收集纳c颗_的散射光信P拍摄其在溶液中做布朗q动的媄像,再对每个颗粒的布朗运动进行追t和分析Q从而计出U米颗粒的流体力学半径和度。这一新颖的纳c颗_表征方法立卛_引了该家医院。果Ӟ马尔文没有让他们失望?
完善功能全方位响应客户需?/strong>
从接z到接受NTA技术,仅在短短?个月内该医院决定采用马?dng)文NanoSightpd最新型L(fng)产品——NS 300U米颗粒跟踪分析仪(以下U“NS 300”)。对此次合作Q马?dng)文NanoSight产品专家梅洁先生表示Q“说服客L(fng)不是我们的专Ӟ而是马尔文的产品本n。?
在ؓ(f)该医院提供详l的讑֤培训后,马尔文NS 300侉K上投入到了研I用中。很快,它凭借卓高效的性能和方便快L(fng)操作获得了客L(fng)I团队的普遍认可?
的质控作?/strong>
外泌体的提取一直以来都是横亘在所有相关研I者面前的一道难题。生物细?yu)中的囊泡种cȝ多,怎样证明提取的颗_一定就是外泌体呢??sh)子昑־镜在鉴定一定数量的颗粒属性方面固然有效,但如前所qͼ?sh)子昑־镜不适合对大量颗_进行快速分析,而动态光散射技术又只能对分布相对均一的样本颗_进行检,q且不具备荧光功能?
配备了先qNTA技术的马尔文NS 300在这时便体现出强大的功能Q它能够q行严格的质控,通过对观察到的所有颗_进行分析和计算Q第一旉l出h_度的详l分布和度的具体信息。同Ӟ研究人员q可以利用荧光标定重点的特定外泌体颗_,从四U不同L镎쀔?05nm?488nm?532nm?35nm——的Ȁ光器中选择一ƾ,搭配相应的o(h)光片Q从而实现对荧光样品的测量,再由NTA技术对其进行单独检,免受复杂hQ如血清、尿液等Q环境的影响。对复杂样品的分辨能力对于像外泌体这L(fng)研究对象来说臛_重要?
ؓ(f)关键的是Q由于NTA的工作原理是通过一束能量集中的Ȁ光穿q玻璃棱镜对样品Q?zhn)颗_的溶液Q进行照,配以ȝ表面镀铬背景信号最化Q可让研Ih员通过昑־镜直接观察到U米颗粒在溶液中的布朗运动,q拍摄媄像,Ҏ(gu)个颗_的布朗q动q行q踪和分析,快速准地计算出样本中U米颗粒的流体力学半径和度。相对于其他传统技术,NTA能对(zhn)Q液中_径范围?0nm-2000nm的颗_进行全方位表征Qƈ且兼h高的分L率,对于_度较ؓ(f)接近的颗_仍然可以准分析,特别适用于外泌体、蛋白质聚集、药物传输、纳c颗_毒理、病毒和疫苗{复杂体pȝ相关研究?
另外Q马?dng)文NanoSightq可以测定颗_的数量Q准指C样本溶液中的单位体U颗_浓度和颗粒数量Q进行以量ؓ(f)基准的粒径测试和分布试。对于客户可能存在的h量不的研究情况Q马?dng)文NS 300也能通过支持低浓度测试(最低可辑ֈ300微升Q帮助实现既定监目标;而同L(fng)条gQ传l电(sh)子显微镜很难实现有效的统计学分析?
操作ѝ工作效率高
通常Q大型A器(如流式细?yu)AQ在使用前都需要进行复杂的预热和校准准备。马?dng)文NS 300则无需q样做,它只要连上电(sh)源就能直接用。ƈ且由于NTA技术采用的是斯托克?爱因斯坦方程的计,所提供的是一个无兌量、折光度和颗_材料的体力学直径Q因此A器可跌J琐的校准直接进入研I分析,为工作h员节省研I前的时间?
作ؓ(f)一U集成程度和自动化程度都非常高的仪器Q马?dng)文NS 300除了Yg讑֤、摄像头和显微镜{集于一体,q整合了颗粒功能与U米颗粒分析技术,为纳c颗_表征提供易于用的可重复^台?0cm x 25cm的设备主机集成了高灉|度科研sCMOS光电(sh)传感器、温控单元和一个具有四U可选L长的Ȁ光。样品池和激光模块也能轻易的拆卸和组装,便于Ud、清z,适合高通量。强大的软g分析能力让马?dng)文NS 300在极短的旉内就能绘制出_径—对应数量分布强度—颗_散光强的三维图谱Qƈ得出与各U粒径颗_有关的全面信息。这样不仅减了Zؓ(f)操作p的概率,更大大提高了研究人员的工作效率?
据该客户介绍Q在使用马尔文A器NS 300之前Q原本用流式细?yu)A?个实验项目,可能要花一个下午的旉Q而现在用马尔文NS 300Q一个小时就能轻松搞定,且分析结果全面、可靠。对他们来说Q这不光节约了大量的旉Q加速推q整个科研进E,qؓ(f)医院节省了宝늚人力成本?
“市面上常见的表征A器往往只具有单一的功能,无法满我们全方位的要求Q之所以最后选择马尔文NS 300也正是考虑到它在功能上的完善。可以说Q到目前为止QNS 300l我们提供了很大的帮助。”该医院血液科某唐姓医生表C?
增值服务保障品最佳状?/strong>
作ؓ(f)颗粒物表征技术的市场领导者,马尔文不断把行业中的尖技术带C国,让客户买到的不只是一个硬Ӟ而是一整套解决Ҏ(gu)。除了技术创斎ͼ马尔文也一贯注重客h务,其技术团队h数是销售团队的3倍,늛了学术专家、应用专家和服务工程师等Q他们会(x)参与客户的研I工作,深入了解客户需求,为其提升产品价倹{?
在此ơ合作中Q除了高品质的品,马尔文所提供的专业的应用支持Q也是该医院选择马尔文的关键原因。在讑֤采购的沟通阶D,马尔文就为客h供了l致的品咨询,帮助他们Ҏ(gu)具体的研I要采购设备。而在开始用阶D,马尔文也安排了专业的指导培训Qƈ针对客户的实验应用环境给多专业徏议,帮助客户q速熟(zhn)设备,满特定实验目标的需求,更快、更好、更有针Ҏ(gu)地获得技术表征结果?
在售后阶D,马尔文的工程师们也ؓ(f)该医院提供了全面的维修和l护服务Q快速响应他们的要求Q帮助他们诊断ƈ解决讑֤在用过E中遇到的问题,保仪器始终处在最佳的工作状态,提升客户满意度?
ȝ与展?/strong>
在马?dng)文NS 300的帮助下Q该医院的外泌体研究表征上目前已取得了初步进展,以有力的证据验证了正常组l细?yu)和肿瘤l织l胞(yu)在外泌体_径及粒径分布浓度上的差异。目前,更多实验q在q行q程中,怿有马?dng)文NS 300的鼎力支持,不久的将来会(x)有更多科研进展呈现?
虽然外泌体作为生物标志物的研I在国内处于v步阶D,但它在(f)床治疗领域已昄出巨大的发展潜力。在临床诊断中,单快速地在复杂生物背景下量外泌体浓度、粒径是必备要求Q目前存在的Ҏ(gu)都无法完地解决q一问题。NTA作ؓ(f)一全新的量技术,h实时观测和荧光测量功能,能够以较高的分L率,准确地测量颗_浓度,从而ؓ(f)外泌体大和度研究提供新的思\。而随着来多U研机构与研I目成果的q一步披Ԍ以马?dng)文NanoSightZ表的C代NTA技术将?x)?f)推进外泌体研I乃至hcd康事业的发展做出更大贡献?